液氮保存對瓣膜細(xì)胞活性及組織結(jié)構(gòu)影響

目的：液氮保存對瓣膜細(xì)胞活性及組織結(jié)構(gòu)影響，為大限度地保存瓣的生物活性和組織結(jié)構(gòu)完整性提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

方法：本實(shí)驗(yàn)以6只豬的主動脈瓣和肺動脈瓣為研究對象。每個瓣葉被分成2份，每只動脈瓣提供6個瓣葉片，隨機(jī)分到6個主動脈瓣或肺動脈瓣組，每組6個瓣葉片(n=6)。6個肺動脈瓣組在含不同抗生素的DMEM液中，于不同溫度下浸泡6h或24h。6個主動脈瓣組經(jīng)抗菌處理，并用速度控制降溫容器或-20℃和-80℃的低溫冰箱梯度降溫后，在液氮中冷凍保存1、3月。應(yīng)用XTT比色法測定瓣膜細(xì)胞活性，并結(jié)合光鏡、透射電鏡。

結(jié)果：液氮保存后瓣膜細(xì)胞活性明顯下降(P<0.05)，內(nèi)皮細(xì)胞脫落，成纖維細(xì)胞不可逆變性增加，細(xì)胞外基質(zhì)纖維連接蛋白與硫酸軟骨素不同程度流失，間質(zhì)膠原纖維排列紊亂，但膠原橫紋結(jié)構(gòu)仍較清晰。冷凍保存1月與3月，結(jié)果無顯著性差異。速度控制降溫容器組的瓣膜細(xì)胞活性和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)、細(xì)胞外基質(zhì)的完整性均好于-20℃和-80℃的低溫冰箱中各過度2小時(shí)降溫組。再次冷凍保存后，瓣膜活性和組織結(jié)構(gòu)損害進(jìn)一步加重，在保存液中加青、鏈霉素對瓣膜活性和組織結(jié)構(gòu)無明顯影響。

結(jié)論：液氮冷凍保存將損害瓣膜的細(xì)胞活性和組織結(jié)構(gòu)完整性，但在冷凍時(shí)間<3月時(shí)，損害的程度與凍存時(shí)間無明顯關(guān)系;速度控制降溫容器可用于同種瓣冷凍保存的梯度降溫。冷凍保存的同種瓣一經(jīng)解凍融化，不宜再次冷凍保存后使用;在保存液中加入青、鏈霉素并不加重瓣膜的損害。